基于THP1-BlueTM NF-κB报告基因法的体外热原检测方法开发与验证
吴彦霖1
张铭露2
杨泽岸1
陈宏宇3
张媛1
1.中国食品药品检定研究院,北京 1000502.河南省药品医疗器械检验院,郑州 4500183.北京石油化工学院,北京 102617
摘要：目的:利用导入核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)报告基因和分泌型胚胎碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)活性的人单核细胞白血病细胞系THP-1细胞,建立一种可用于体外热原检测的方法,并考察方法的可行性和品种适用性.方法:参照《中华人民共和国药典》四部通则9101分析方法验证和9301注射剂安全检查法应用指导原则(附单核细胞活化反应测定法),以细菌内毒素国家标准品作为基准,对THP1-BlueTM NF-κB报告基因法进行专属性、精密度、耐用性等方法学研究;以精密度和阈值作为方法可行性分析的判断指标;并进行品种适用性研究.结果:所建立的方法符合《中华人民共和国药典》9301中单核细胞活化反应测定法的要求,R2均为0.999以上;计算最低检测限0.03 EU·mL-1;以内毒素含量为0.5,1.0 EU·mL-1的溶液做回收实验,方法的准确度分别为101％和106％;通过本方法完成人凝血酶原复合物、冻干人纤维蛋白原、b型流感、23价肺炎、牛痘疫苗的品种适用性研究.结论:THP1-BlueTM NF-κB 报告基因法满足单核细胞激活实验要求,可用于体外热原物质检测.
关键词：单核细胞激活实验热原检测THP1-BlueTM NF-κB报告基因法
分类号：R917(药物分析)
资助基金：国家重大新药创制科技重大专项(2018ZX09101001)
论文发表日期：2024-11-30
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 2331-2337 )
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