α1-抗胰蛋白酶的制备及其2种活性测定方法的对比分析
付艳丽
郭玉婷
孔涛
马亚茹
梁凌宇
陈勇
兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室/甘肃省疫苗工程技术研究中心,兰州 730046
摘要：目的:从Cohn法组分IV沉淀中分离出α1-抗胰蛋白酶(alpha-1 antitrypsin,AAT),并对2 种测定AAT活性的方法进行对比分析.方法:组分IV沉淀溶解、压滤以及澄清过滤后的料液经SD病毒灭活后,进行3 步层析、超滤浓缩、除菌过滤、分装冻干,最后经干热病毒灭活制成AAT制品.分别用胰蛋白酶法和弹性蛋白酶法测定AAT的活性,同时对2 种方法的线性范围、专属性、准确性、重复性、中间精密度、线性、耐用性和一致性进行对比分析.结果:从组分IV沉淀中分离出AAT纯品;2 种检测方法对于测定AAT活性的专属性和线性均较好,其中胰蛋白酶法检测范围为0～16μg·mL-1,弹性蛋白酶法检测范围为0～2μg·mL-1,重复性和中间精密度验证中RSD均<10%,高、中、低浓度的加标回收率均在 80%～120%之间,孵育时间在20～40 min内2 种方法的耐用性较好,且 2 种方法测定AAT活性的结果差异无统计学意义(P=0.173 0,>0.05).结论:本研究成功从组分IV沉淀中分离出AAT纯品.胰蛋白酶法和弹性蛋白酶法测定AAT活性的检测结果均具有良好的专属性、线性、重复性、中间精密度、准确性和耐用性,且2 种方法具有良好的一致性,方法简便可靠,均可用于AAT制品的活性检测.
关键词：α1-抗胰蛋白酶胰蛋白酶法弹性蛋白酶法活性
分类号：R915(药物基础科学)
论文发表日期：2025-06-15
在线出版日期：2026-08-14（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1178-1184 )
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