MiR-148b-3p通过调控CDKN1B表达影响心肌细胞增殖及凋亡的分子机制
王嘉明1
郭丽敏2
郭艳娟2
程国良3
1.102600 北京,首都医科大学大兴教学医院2.102600 北京,北京市大兴区人民医院心内科3.276000 临沂,国家手性制药工程技术研究中心
摘要：目的 探讨微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)是否通过调控细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B(CDKN1B)表达影响心肌细胞增殖及凋亡.方法 通过Lipofectamine2000将anti-miR-NC、anti-miR-148b-3p、pcDNA、pcDNA-CDKN1B、anti-miR-NC与si-NC、anti-miR-148b-3p与si-CDKN1B转染至心肌细胞,给予10μg/ml的脂多糖(LPS)刺激24 h,分别记作LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-CDKN1B组、LPS+anti-miR-NC+si-NC组、LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组.使用含有10μg/mL的LPS处理H9c2细胞24 h,记作LPS组.同时将正常培养的心肌细胞作为Con组.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测miR-148b-3p、CDKN1B的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-148b-3p与CDKN1B的靶向作用;Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的表达量.结果 与Con组比较,LPS组miR-148b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),CDKN1B mRNA及蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-CDKN1B组心肌细胞存活率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-148b-3p可靶向结合CDKN1B;与LPS+anti-miR-NC+si-NC组比较,LPS+anti-miR-148b-3p+si-CDKN1B组细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),P21、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05).结论 抑制miR-148b-3p的表达可通过靶向调控CDKN1B表达从而促进LPS诱导的心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡.
关键词：微小RNA-148b-3p细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B心肌细胞脂多糖增殖凋亡
分类号：R542.2(心脏、血管（循环系）疾病)
论文发表日期：2020-07-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 846-850,854 )
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