miR-26a-5p下调DNMT3A表达抑制心肌成纤维细胞活化增殖的机制研究
何涛1
丁安1
周文杰2
杨仁杰2
1.433124 潜江,湖北江汉油田总医院心血管内科2.430000 武汉,湖北省人民医院心血管内科
摘要：目的 研究miR-26a-5p在SD大鼠心肌纤维化心脏组织中的表达及通过下调DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化增殖的影响.方法 构建SD大鼠心肌纤维化模型,HE和Masson法观察病理学改变,qRT-PCR检测miR-26a-5p的表达,Western blot法测定Col1A1、α-SMA、DNMT3A表达.TargetScan预测miR-26a-5p与DNMT3A间靶向结合关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证;提取SD乳鼠心肌成纤维细胞,将miR-NC、miR-26a-5p、miR-26a-5p和pcDNA 3.1及miR-26a-5p和pcDNA 3.1-DNMT3A转染至细胞中,分别记为miR-NC组、miR-26a-5p组、miR-26a-5p+Vector组和miR-26a-5p+DNMT3A组.qRT-PCR检测miR-26a-5p、DNMT3A、Col1A1和α-SMA mRNA水平,Western blot测定DNMT3A、Col1A1和α-SMA蛋白表达,MTT法检测心肌成纤维细胞增殖能力.结果 ISO组SD大鼠心肌细胞排列紊乱,组织胶原沉积明显增多,Col1A1、α-SMA、DNMT3A蛋白表达升高,miR-26a-5p表达降低.TargetScan预测DNMT3A是miR-26a-5p的潜在靶基因.双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,miR-26a-5p组心肌成纤维细胞中DNMT3A-Wt荧光素酶活性[(0.38±0.05)vs.(1.03±0.11),P<0.05]较miR-NC组显著降低,而miR-26a-5p组DNMT3A-Mut荧光素酶活性[(0.97±0.09)vs.(0.99±0.10),P>0.05]与miR-NC组比较无明显差异,提示DNMT3A是miR-26a-5p的一个靶基因.与miR-NC组比较,miR-26a-5p组心肌成纤维细胞中Col1A1[(0.42±0.04)vs.(1.04±0.09),(0.33±0.03)vs.(0.77±0.08),P<0.05]、α-SMA[(0.53±0.06)vs.(1.02±0.10),(0.36±0.04)vs.(0.86±0.09),P<0.05]和DNMT3A[(0.25±0.03)vs.(0.97±0.09),(0.32±0.03)vs.(0.75±0.08),P<0.05]的mRNA和蛋白表达及细胞增殖能力均显著降低,而外源回补DNMT3A可逆转miR-26a-5p对心肌成纤维细胞活化增殖的抑制作用.结论 miR-26a-5p在SD大鼠心肌纤维化心脏组织中低表达,miR-26a-5p可能通过下调DNMT3A来抑制心肌成纤维细胞的活化增殖,从而改善心肌纤维化.
关键词：miR-26a-5pDNA甲基化转移酶3A心肌成纤维细胞心肌纤维化
分类号：R542.2(心脏、血管（循环系）疾病)
资助基金：湖北省科技厅项目(EK110371)
论文发表日期：2020-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1179-1184 )
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