ELISA法检测血清中抗CNN2抗体的实验条件优化性探讨
宋伟
刘玲珑
王鹏飞
姚清媚
周素芳
1.530021 南宁,广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室2.530021 南宁,广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室3.530021 南宁,广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室4.530021 南宁,广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室5.530021 南宁,广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
摘要：目的 探讨血清抗钙调节蛋白Calponin 2 (CNN2)抗体的最适酶联免疫吸附测定(enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)实验条件.方法 将BL21(DE3) pLysS-pColdⅢ-C基因工程菌重组表达而分离纯化的CNN2包被至酶标板.采集肝细胞癌患者血清和正常人血清,探讨蛋白包被浓度、血清稀释液的选择、封闭方式及条件的选择、HRP标记亲和素稀释度的最适条件.结果 CNN2蛋白浓度为10 μg/ml时为最适蛋白包被浓度.0.5％胎牛血清蛋白(BSA)为最适封闭方式.使用PBST来稀释血清,成本低,效果好.亲和素的最适稀释比为1∶9 000.最适实验条件的重复性良好.ROC曲线分析结果显示,最适实验条件下,该检测方法ROC曲线下面积(AUC)为0.978(95％CI:0.947～1.000,P=0.000);截断值为0.484,其对应的灵敏度为96.0％,特异度为93.0％.结论 构建了检测血清抗CNN2抗体的最适ELISA实验条件.
关键词：肝细胞癌Calponin 2酶联免疫吸附测定
分类号：R-331(实验医学、医学实验)
资助基金：国家自然科学基金(81460432)
论文发表日期：2020-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 462-466 )
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