肝癌细胞中丛生蛋白的差异性表达检测和启动子表达质粒的构建
于秋丽
王峰
530021 南宁,广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
摘要：目的 检测肝癌细胞HepG2中丛生蛋白(CLU)的表达情况并构建肝癌差异性表达基因CLU启动子表达质粒,为后续进行CLU基因差异性表达及机制研究奠定基础.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CLU mRNA在肝细胞癌(HCC)HepG2细胞和正常肝细胞L02中的表达水平.应用生物信息学分析和序列测序获得CLU基因启动子序列,并将其插入到pGL3-Basic质粒中.通过酶切、琼脂糖凝胶电泳及测序对构建完成的pGL3-CLUP质粒进行验证.结果 RT-qPCR结果表明HepG2细胞CLU mRNA的表达量约是L02细胞的9.38倍,差异有统计学意义(P<0.05).pGL3-CLUP质粒经单酶切后为一条电泳条带,长度为5000～6000 bp;双酶切后的质粒为两条电泳条带,一条为5000 bp左右,另一条为1000～1500 bp,大小与质粒和启动子大小一致.测序结果也表明CLU启动子已插入到pGL3-Basic质粒启动子区.结论 CLU在HCC细胞中高表达.pGL3-CLUP启动子表达质粒构建成功.
关键词：肝癌差异性表达基因启动子表达质粒
分类号：R73-37(肿瘤学实验研究)
资助基金：国家自然科学基金(81660510)国家自然科学基金(2014GXNSFBA118206)
论文发表日期：2021-03-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 292-296 )
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