PDK1基因shRNA慢病毒载体构建及干扰效应鉴定
郝南
农德勇
李钻
林俊浩
黄桂海
李锡明
李伟
530021 南宁,广西壮族自治区人民医院泌尿外科
摘要：目的 构建PDK1基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,鉴定其对PC-3细胞PDK1基因的干扰效应.方法 在GenBank数据库检索PDK1基因序列,参考该序列设计PDK1特异性过干扰序列,酶切过表达用载体LV3,纯化酶切产物后进行定向连接.将重组干扰病毒质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,测定病毒滴度.将构建的慢病毒感染PC-3细胞,采用real-time RT-PCR法鉴定其PDK1基因干扰效应.结果 测序结果证实成功构建PDK1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,慢病毒滴度为1×108 TU/ml.real-time RT-PCR结果显示,LV3-PDK1-shRNA慢病毒感染PC-3细胞可显著抑制其PDK1 mRNA的表达(P<0.05).结论 成功构建PDK1基因RNAi慢病毒载体,获得稳定沉默PDK1基因的PC-3细胞株,为后续研究PDK1基因在前列腺癌细胞模型中的作用奠定基础.
关键词：RNA干扰3-磷脂酰肌醇依赖的蛋白激酶-1转染前列腺癌慢病毒载体
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81460387)
论文发表日期：2021-08-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 773-778 )
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