LDR-qPCR法检测miRNA122a的表达及其与乳腺癌雌激素调控的关系
恽文1
季明华2
李文静3
李建4
钟山亮5
唐金海4
赵建华5
1.徐州,徐州医学院外科学教研室,江苏,2210002.南京,江苏省肿瘤医院放疗科,江苏,2100093.南京,南京医科大学,江苏,2100294.南京,江苏省肿瘤医院普外科,江苏,2100095.南京,江苏省临床检验中心,江苏,210009
摘要：目的 建立一种新的基于连接酶依赖性反应的miR-122a实时定量PCR检测方法 (LDR-qPCR);研究乳腺癌细胞MCF-7中miR-122a的表达以及雌激素水平对其的影响.方法 以乳腺癌细胞MCF-7为样本、成熟的miR-122a为检测对象,将探针的连接反应和实时荧光定量PCR技术相结合,建立LDR-qPCR法,并开展方法 学评价以及不同(有或无激素)培养环境下miR-122a的表达分析.结果 LDR-qPCR法的扩增产物特异,经测序证实为miR-122a;LDR-qPCR法重复性好(cv<10%);检测下限为5 pg/μL总RNA,比茎环RT-qPCR法(50 pg/μL)敏感10倍.miR-122a在激素饥饿的MCF-7细胞中表达上调,约为常规培养细胞的3.65倍;经5 nmol/L雌二醇处理后又出现下调(P=0.040),但未回到常规培养细胞水平.结论 LDR-qPCR法特异、灵敏,检测范围宽;乳腺癌细胞MCF-7可表达miR-122a并受雌激素水平的调节.
关键词：荧光定量PCRmiR-122a乳腺癌雌激素
资助基金：国家自然科学基金(30840093)江苏省社会发展科技计划(BS2007077)
论文发表日期：2012-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 209-213 )
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