GM130通过14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及机制研究
郑依果1
易永芬2
罗祎3
1.400016 重庆,重庆医科大学基础医学院 分子医学与肿瘤研究中心;400016 重庆,重庆医科大学 分子医学检测中心2.400016 重庆,重庆医科大学基础医学院 分子医学与肿瘤研究中心;400016 重庆,重庆医科大学 分子医学检测中心;400042 重庆,重庆医科大学附属第一医院 病理科3.400042 重庆,重庆医科大学附属第一医院 妇科
摘要：目的 探讨高尔基体基质蛋白 130(GM130)通过 14-3-3ζ对卵巢癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 采用免疫组化法检测在 20 例正常卵巢上皮组织和 42 例卵巢上皮恶性肿瘤中GM130和 14-3-3ζ的表达,分析二者相关性.采用Western blot和RT-PCR法检测卵巢癌SKOV3/A2780 细胞株GM130 和 14-3-3ζ蛋白及其mRNA表达情况,筛选出高表达细胞株.采用免疫荧光染色法检测GM130与 14-3-3ζ在卵巢癌细胞中的共表达情况.将设计好的重组表达质粒shRNA-GM130 片段稳转进入卵巢癌细胞中,采用Western blot和RT-PCR筛选出降低GM130 的最佳片段.细胞分为三组:空白组(WT)、对照组(NC)、低表达组(313),采用CCK法和流式细胞术分别检测各组卵巢癌细胞生殖情况及周期变化情况,采用 Western blot 法检测各组 14-3-3ζ、GRASP65、P115 及增殖相关蛋白表达水平.结果 GM130 和 14-3-3ζ在卵巢恶性肿瘤组织中的表达水平高于正常卵巢组织(P＜0.001).在卵巢恶性肿瘤组织中,GM130 和 14-3-3ζ呈正相关关系(r=0.873,P＜0.001).GM130 蛋白及其mRNA在SKOV3 细胞中的表达量高于A2780 细胞(P＜0.05),14-3-3ζ蛋白及其mRNA在SKOV3 细胞和A2780 细胞中比较差异无统计学意义(P＞0.05).后续实验选用SKOV3 细胞.免疫荧光共定位染色显示,GM130 与 14-3-3ζ主要在胞质表达,前者近核膜部分呈堆叠样表达量较高,后者胞核中表达较少,二者可能存在共定位关系.转染 313 组片段后,对GM130 的抑制效果最好.转染质粒 313 组细胞增殖能力降低,细胞在G1 期阻滞的数量增多,G2 期阻滞数量减少,S期阻滞的细胞数量稍减少,GM130、14-3-3ζ、P115、Cyclin A、Cdc25A蛋白相对表达水平降低,P21 蛋白相对表达水平升高(P＜0.05).结论 抑制GM130 可抑制卵巢癌细胞增殖,其机制可能与抑制 14-3-3ζ表达,影响卵巢癌细胞周期有关.
关键词：卵巢癌高尔基体基质蛋白13014-3-3ζ细胞增殖细胞周期
资助基金：国家自然科学基金(30672431)
论文发表日期：2024-04-20
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 170-177 )
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