RNA干扰茄病镰刀菌ALP基因及其基因沉默菌株的制备
梁涛1
刘珂凤1
何宏2
赵桂秋1
王婷1
喻文倩1
1.青岛大学医学院附属医院眼科,青岛,2660032.青岛大学医学院附属医院检验科,青岛,266003
摘要：目的 构建RNA干扰质粒载体抑制茄病镰刀菌碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)基因,通过检测ALP的表达及酶活性变化筛选出基因沉默菌株.方法 构建2个ALP的干扰载体,转化茄病镰刀菌孢子,获得ALP基因沉默菌株△ALP1、△ALP2,通过RT-PCR检测△ALP1、△ALP2的ALP基因mRNA变化,并通过蛋白琼脂廓清率培养基检测ALP酶活性变化,对所得菌株的毒力进行判断.结果 RNA干扰后所获基因沉默菌株中,ALP的mRNA表达量显著低于标准茄病镰刀菌株(F =184.67,P＜0.01),其中△ALP2抑制效果较好、酶活性显著低于标准菌株及△ALPI(q=5.276、5.463,P＜0.01).结论 通过LiAc转化法对茄病镰刀菌ALP进行RNA干扰,可有效抑制茄病镰刀菌ALP的表达；ALP基因沉默茄病镰刀菌株的获取,为进行动物体内实验、深入研究ALP在茄病镰刀菌性角膜炎发病机制中的作用、探索新型治疗方法提供思路.
关键词：茄病镰刀菌真菌性角膜炎丝氨酸蛋白酶RNA干扰
分类号：R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 10-13,19 )
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