白念珠菌天冬氨酸蛋白酶基因SAP2在大肠杆菌中的表达及产物纯化
李蕾
仇萌
邹先彪
1.解放军总医院第一附属医院皮肤科,北京,1000372.解放军总医院第一附属医院皮肤科,北京,1000373.解放军总医院第一附属医院皮肤科,北京,100037
摘要：目的 构建SAP2重组原核表达载体并表达、纯化出可溶性的蛋白,为抗体制备及Sap2抗原检测奠定基础.方法 提取白念珠菌基因组DNA为模板,经PCR方法获取SAP2目的基因.双酶切SAP2基因与原核表达载体pMAL-c2x(+),连接酶切产物,转化大肠杆菌TOP10感受态细菌,筛选菌落和测序鉴定.将pMAL-c2x/SAP2重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达出可溶性的融合蛋白,经直链淀粉树脂亲和层析、蛋白酶Factor Xa切割标签获得纯化的Sap2蛋白.结果 经PCR扩增获得正确的SAP2序列并定向插入原核表达载体pMAL-c2x(+)中.重组原核表达载体pMAL-c2x/SAP2经IPTG诱导14 h后表达出可溶性的融合蛋白,并经纯化、切除标签后得到目的蛋白.结论 成功构建了白念珠菌天冬氨酸蛋白酶原核表达质粒pMAL-c2x/SAP2,该质粒在BL21 (DE3)中可获得高效融合表达,通过亲和层析纯化及标签切割得到了氨基酸序列同天然蛋白一致的目的蛋白.
关键词：白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶SAP2基因重组质粒
分类号：R379.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 14-19 )
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