长片段融合PCR在构建烟曲霉rho1基因回补株中的应用
韩改革1
贾晓东2
韩雪琳2
赵帅2
韩黎2
1.中南大学基础医学院,长沙410000;中国人民解放军疾病预防控制所,北京1000712.中国人民解放军疾病预防控制所,北京,100071
摘要：目的 融合PCR是一种常用的构建重组片段或重组质粒的手段,但长片段融合PCR的难度较大.文中将探讨长片段融合PCR过程中引物设计及扩增条件对产物的影响.方法 以构建烟曲霉rho 1基因回补株为例,采用融合PCR的方法扩增重组片段(长达6.5 kb),在引物设计时引入不同大小的同源区,并设置不同的扩增体系.结果 当设计引物的同源区为35 bp,选用具有高扩增效率、高保真性的DNA聚合酶,以及各片段在融合PCR反应体系中的浓度为15 ng/μL时,实现了长达6.5 kb的片段扩增并完成了烟曲霉rho 1回补株的构建.结论 在合适的PCR引物设计、片段浓度配比及聚合酶条件下,长片段融合PCR在丝状真菌的基因敲除及回补株的构建中是一种非常有效的工具.
关键词：融合PCR烟曲霉rho 1基因回补
分类号：R379.6(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81101229)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 129-133 )
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