白念珠菌SPE1基因高表达菌株构建及鉴定
姚响文
赵柳娅
颜钰
鹿辉
曹颖瑛
姜远英
1.第二军医大学药学院新药研究中心,上海,2004332.第二军医大学药学院新药研究中心,上海,2004333.第二军医大学药学院新药研究中心,上海,2004334.第二军医大学药学院新药研究中心,上海,2004335.第二军医大学药学院新药研究中心,上海,2004336.第二军医大学药学院新药研究中心,上海,200433
摘要：目的 构建白念珠菌SPE1基因高表达菌株.方法 将白念珠菌SPE1基因的ORF置于高表达质粒载体pCaE-XP的MET3启动子后面,构建pCaEXP-SPE1的高表达质粒,然后采用醋酸锂转染法将高表达质粒转染白念珠菌RM1000中,在SD-ura-met-cys-选择性固体培养基上筛选阳性克隆,抽取基因组进行PCR验证,将验证为阳性转染子的菌落采用RealTime RT-PCR方法进行SPE1基因转录水平的表达验证.结果 通过酶切鉴定pCaEXP-SPE1高表达质粒构建正确；通过PCR验证表明SPE1基因整合到亲本菌中的RP10位点；通过Real Time RT-PCR方法筛选出SPE1基因在转录水平高表达的菌株.结论 利用高表达质粒载体pCaEXP通过基因同源重组等方法正确构建SPE1基因高表达的白念珠菌.
关键词：白念珠菌SPE1高表达
分类号：R379.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81271798)国家重点基础研究发展计划（973计划）(2013CB531602)
论文发表日期：2013-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 198-201 )
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