白念珠菌HSP90与人源HSP90的克隆表达及其C端的比较分析
孟靖顺1
吴建华1
赵静1
王玉莲1
薛伟2
1.上海长海医院,上海,2004332.中国科学院大学,上海,200031
摘要：目的 分别体外表达纯化白念珠菌HSP90 (CaHSP90)和人源HSP90 (hHSP90)并分析C-端序列差异对其体外状态下分子聚合度的影响.方法 我们将CaHSP90、hHSP90野生型及其C-端酶切碱基序列通过PCR进行扩增并通过NdeI/XhoI酶切位点连接到到pET22b+质粒中.将构建好的上述质粒转入大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行表达并通过Ni2+-NTA柱以及Superdex-200快速柱层析系统(FPLC)纯化.所得蛋白通过SDS-PAGE以及分子排阻色谱(SEC)测定分子量和聚合状态.结果 通过测序鉴定所有质粒构建成功,并最终纯化得到足够纯度的蛋白进行SEC分析实验.分析结果表明野生型CaHSP90和hHSP90在体外具有相似的聚合度,而C-端突变后则存在明显差异.结论 CaHSP90和hHSP90的C-端结构域对其体外聚合状态有着不同的影响,CaHSP90的C-端结构域有可能成为CaHSP90抑制剂一个潜在靶点.
关键词：白念珠菌HSP90蛋白结构蛋白表达与纯化
分类号：R379.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 321-326 )
英文信息