MMP9、S100A10基因沉默稳转小鼠细胞系的构建及验证
陈雪雯
朱红梅
温海
1.上海市长征医院皮肤科 全军真菌病重点实验室 上海市医学真菌分子生物学重点实验室,上海,2000032.上海市长征医院皮肤科 全军真菌病重点实验室 上海市医学真菌分子生物学重点实验室,上海,2000033.上海市长征医院皮肤科 全军真菌病重点实验室 上海市医学真菌分子生物学重点实验室,上海,200003
摘要：目的 分别构建小鼠MMP9、S100A10沉默的稳转细胞系,并验证功能.方法 构建能有效干扰S100A10、MMP9表达的慢病毒LV-musMMP9-shRNA、LV-musS100 A10-shRNA,将其转染293T细胞进行包装、扩增及质量检测.将包装好的慢病毒分别转染b.End3,嘌呤霉素筛选稳转细胞系,通过荧光显微镜、RT-qPCR检测对应目的基因表达量,构建稳转细胞系.结果 成功构建有效干扰S100A10、MMP-9表达的稳转细胞系,其滴度分别为1×108 TU/mL、3×108 TU/mL.荧光显微镜检测稳转细胞的荧光表达接近100％;RT-qPCR分别检测MMP9、S100A10基因表达下调率分别为78％、72％.结论 构建有效干扰S100A10、MMP-9表达的稳转细胞系,为控制单一变量直观探究S100A10、MMP-9影响隐球菌穿过血脑屏障的能力等研究奠定了重要基础,为隐球菌性脑炎/脑膜炎的临床治疗靶点研究开辟新的思路.
关键词：慢病毒载体基质金属蛋白酶9 (MMP9)S100A10b.End3
分类号：R392.1(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(31470252)国家自然科学基金(81271800)国家自然科学基金(31270181)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 19-22,18 )
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