新生隐球菌漆酶的原核表达
邓东灵
孔庆涛
张媛媛
袁红珊
刘慧
桑红
1.南方医科大学金陵医院(南京军区南京总医院)皮肤科,210002南京2.南方医科大学金陵医院(南京军区南京总医院)皮肤科,210002南京3.南方医科大学金陵医院(南京军区南京总医院)皮肤科,210002南京4.南方医科大学金陵医院(南京军区南京总医院)皮肤科,210002南京5.南方医科大学金陵医院(南京军区南京总医院)皮肤科,210002南京6.南方医科大学金陵医院(南京军区南京总医院)皮肤科,210002南京
摘要：目的 构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体并表达鉴定.方法 利用PCR技术扩增LAC1基因的编码序列,将其正确插入pET-28a(+)载体中得到重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后进行PCR鉴定及基因测序.将正确重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过不同条件进仃诱导表达,用SDS-PAGE电泳及MALDI-TOF质谱检测并鉴定目的蛋白质.通过尿素对包涵体蛋白进行变性,并对变性后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及MALDI-TOF质潜检测.结果 成功构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体,PCR鉴定呈阳性且基因测序结果与目的序列一致,SDS-PAGE显示在大肠杆菌BL21中成功诱导表达出相对分子质量(Mr)约为68 000的目的蛋白,经MALDI-TOF质谱鉴定目的蛋白在此表达系统中不可溶,可能以包涵体形式存在.结论 成功构建含His-tag的新生隐球菌漆酶的原核表达载体,为进一步纯化并解析新生隐球菌漆酶的晶体结构奠定了基础.
关键词：新生隐球菌漆酶原核表达包涵体
分类号：R379.5(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81371782)江苏省皮肤病学创新团队项目(CXTDA2017038)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 208-212 )
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