申克孢子丝菌STE20基因RNA干扰菌株的构建方法
赵林1
王林会2
郑方亮3
侯彬彬1
1.大连医科大学附属第二医院,大连,1160212.大连理工大学生命科学院,大连,1160243.辽宁大学生命科学院,沈阳,110031
摘要：目的 构建真菌通用的RNA干扰载体,以广泛用在多种真菌基因干扰的研究中.方法 利用现有的植物双元表达载体进行改造,将pBlueScriptⅡ的多克隆位点(MCS)酶切下来构建干扰载体;为使载体适于农杆菌转化,加入T-DNA边界重复序列;为便于转化后的筛选,将潮霉素抗性基因构建到干扰载体上.改造以前的干扰载体仅适于青霉菌属的RNA干扰,为扩大干扰范围,扩增pSilent-1质粒中的真菌通用启动子Ptrpc,间隔序列和终止子Ttrpc,并引入潮霉素抗性基因,使其在间隔序列两侧加上目的基因的正反向干扰序列以构建载体.结果 利用本实验构建的载体PCB309-PSUST及优化的反应体系成功实现了对孢子丝菌STE20基因的有效干扰,操作简便、转化效率高、转化子稳定.结论 成功构建的这种载体适于根癌农杆菌介导,能够对多种丝状真菌基因进行RNA干扰研究用.
关键词：申克孢子丝菌STE20RNA干扰载体构建
分类号：R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81502737)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 129-133 )
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