实时荧光PCR检测巴西孢子丝菌的实验方法的建立
张明瑞1
周盈1
李福秋1
姚春丽1
杨鑫2
龚杰3
赵飞3
1.吉林大学第二医院皮肤科,长春,1300222.长春市中心医院,长春,1300513.中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,北京,102206
摘要：目的 建立一种快速、特异、灵敏的荧光PCR方法 检测巴西孢子丝菌.方法比对NCBI数据库中所有巴西孢子丝菌内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列,在保守区域设计并合成特异性引物和探针,建立并优化荧光PCR检测方法.对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价.通过巴西孢子丝菌小鼠感染模型,与组织培养比较,对本研究中的方法进行评价.结果 建立的实时荧光PCR方法对巴西孢子丝菌的检测限为100fg.该方法对申克孢子丝菌、球形孢子丝菌、其他常见致病真菌28种、常见细菌3种以及人类基因组和小鼠基因组扩增结果均为阴性,特异度为100％.对巴西孢子丝菌感染小鼠脑、肝、肺、脾、肾及淋巴结检测与培养结果相一致.结论 本研究建立的荧光PCR方法可快速、灵敏、特异地鉴定巴西孢子丝菌,并能够有效的对感染小鼠模型标本进行检测,有助于孢子丝菌病的早期特异性病原学诊断.
关键词：实时荧光PCR巴西孢子丝菌鉴定感染动物模型
分类号：R446.5(诊断学)R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：吉林省孢子丝菌病流行病学调查(3D5177763429)病原细菌与突发急性真菌感染高通量快速检测与应急筛检技术研究(2018ZX10712-001)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 297-302 )
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