新生隐球菌酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定
赵静宇1
刘意抒2
方伟3
廖万清3
王桂祯4
顾菊林5
1.上海东方肝胆外科医院皮肤科,上海 200438;上海长征医院皮肤科,上海市医学真菌分子生物学重点实验室,上海 2000032.上海东方肝胆外科医院内科教研室,上海 2004383.上海长征医院皮肤科,上海市医学真菌分子生物学重点实验室,上海 2000034.上海市第十人民医院急诊科,上海 2000725.上海东方肝胆外科医院皮肤科,上海 200438
摘要：目的 构建新生隐球菌H99细胞酵母双杂交cDNA文库,为后续深入研究新生隐球菌的蛋白功能以及病原-宿主相互作用机制奠定基础.方法 提取对数生长中期的隐球菌细胞mRNA,以5'端标记有Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter.分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库.结果 入门文库总容量为1.13×107 CFU,阳性率为90.63％.表达文库总容量为1.25×107 CFU,阳性率100％.结论 构建的表达文库具有较高的质量,此文库可用于研究新生隐球菌的蛋白互作机制,筛选与宿主蛋白相互作用的隐球菌蛋白,为新生隐球菌的分子致病机制研究奠定基础.
关键词：新生隐球菌酵母双杂交cDNA文库
分类号：R379.5(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81772159)国家重点实验室开放基金(20160001)
论文发表日期：2020-06-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 134-137 )
英文信息