Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas 9敲除载体的构建
李敏英1
黄欢1
李倩1
骆明芬1
王晓悦1
刘红芳1
曾维英1
席丽艳2
1.南方医科大学皮肤病医院,实验研究中心,广州 5100912.南方医科大学皮肤病医院,实验研究中心,广州 510091;中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科,广州510120
摘要：目的 改造pFC332质粒,简化实验流程,构建Fonsecaea monophora PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体.方法 设计引物PCR扩增pFC334质粒上的gRNA骨架,获得已经插入AarⅠ酶切位点的gRNA骨架片段后,使用PstI和MerI酶线性化pFC334载体,构建pFC334-AarⅠ载体,使用MreⅠ和BglⅡ酶对其和pFC332质粒进行双酶切,连接后获得pFC332-gRNA-AarⅠ载体,设计gRNA,最后将各片段插入到载体中.结果 测序得到16533bp大小的改造后的pFC332-gRNA-AarⅠ质粒,构建了PKS1基因的CRISPR-Cas9敲除载体,通过PCR,酶切以及测序的方法确定敲除载体构建成功.结论 成功构建Fonsecaea monophora聚酮合酶基因的CRISPR-Cas9敲除载体,为研究PKS1基因及DHN-黑素在Fonsecaea monophora的生物学功能奠定了良好的基础.
关键词：Fonsecaea monophora聚酮合酶基因CRISPR-Cas9载体构建
分类号：R379.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(81873960)国家自然科学基金(81601746)广东省医学科学技术研究项目(A2019345)
论文发表日期：2021-10-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 303-307,313 )
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