胱天蛋白酶募集域蛋白9的可溶性表达及纯化
彭敏1
张晨1
王珏2
陈浩2
孔庆涛1
桑红1
1.南京大学医学院附属金陵医院皮肤科,南京2100022.南京大学化学化工学院,南京210023
摘要：目的 制备可溶性TrxA-CARD9蛋白及其临床突变型.方法 将构建好的原核系统表达质粒转化至大肠杆菌感受态细胞后,通过不同诱导条件筛选合适的表达条件.使用精氨酸辅助目的蛋白进行非变性溶解,并通过聚乙烯亚胺和硫酸铵沉淀法去除核酸和杂蛋白,最终利用阴离子交换和肝素亲和色谱柱纯化融合蛋白.结果 成功构建表达质粒并纯化融合蛋白,酶切去除TrxA标签后通过质谱鉴定其为可溶性CARD9蛋白.结论 成功实现了全长CARD9序列在原核系统中的高可溶性表达,为研究CARD9蛋白生物结构和功能提供了基础,并为寻找治疗真菌感染的潜在靶点和治疗方法提供新思路.
关键词：胱天蛋白酶募集域蛋白精氨酸Trx-A标签蛋白表达可溶性蛋白
分类号：Q51(蛋白质)
资助基金：江苏省皮肤病学创新团队项目(CXTDA2017038)
论文发表日期：2023-04-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 140-145 )
英文信息