微滴式数字PCR检测技术在马尔尼菲篮状菌病诊断的应用研究
张华1
潘艳娜2
饶吉3
阮怡婷3
韦宣彤2
蓝吉慧2
胡敏2
罗兰波2
杜白音子3
杜明威3
潘炜华3
1.海军军医大学附属长征医院皮肤科,上海 200003;海军第905医院皮肤科,上海 2000032.广西壮族自治区胸科医院,柳州 5450053.海军军医大学附属长征医院皮肤科,上海 200003
摘要：目的 构建基于微滴式数字PCR(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)的马尔尼菲篮状菌核酸检测方法,验证其检测痕量样本时的灵敏性,从而拓宽马尔尼菲篮状菌分子检测技术的精度范围.方法 筛选已成功运用于实时荧光定量PCR检测马尔尼菲篮状菌的扩增引物及探针序列,并在其基础上建立ddPCR检测体系.利用携带靶序列区域的质粒模拟马尔尼菲篮状菌临床样品,其他临床常见致病真菌作为无模版对照,评估本研究中ddPCR检测方法的特异性及检测限.结果 本研究中ddPCR检测体系的特异性高,与各种无模板对照均无交叉反应;当模板浓度高于 7.78 copies/μL时,检测体系可 100%检测出阳性结果;整个定量检测流程操作简单,相较qPCR无需配制标准曲线即可在痕量样本中得到定量结果.结论 ddPCR是一种新型、灵敏、操作简单的核酸检测方法,具有高度的特异性和极为灵敏的检测限,其定量结果有助于操作者对检测数据的有效性进行解读,具备进一步在临床应用的潜力.
关键词：微滴式数字PCR马尔尼菲篮状菌诊断
分类号：R446.5(诊断学)R519.8(传染病)
资助基金：海军军医大学第二附属医院临床研究项目(2023YJBF-FH03)海军军医大学第二附属医院学科建设项目(2024DZXYYXK-104)
论文发表日期：2025-02-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 20-27 )
英文信息