白假丝酵母菌抗原在外阴阴道假丝酵母菌病中免疫原性的初步研究
杨楠1
马守叶2
祝秉东3
刘会玲4
1.甘肃省人民医院妇科，兰州 730030；甘肃省妇幼保健院（甘肃省中心医院），兰州 7300502.甘肃省人民医院妇科，兰州 730030；甘肃省医学检验临床医学研究中心，兰州 7300303.兰州大学基础医学院，兰州 7300304.甘肃省人民医院妇科，兰州 730030
摘要：目的 利用生物信息学分析技术筛选白假丝酵母菌抗原,初步研究其在外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal can-didiasis,VVC)中的免疫原性.方法 ①应用NCBI、CGD、AlphaFold2、VaxiJen、Expasy、IEDB等网络数据库,对编码白假丝酵母菌蛋白的基因序列、蛋白序列、蛋白结构、蛋白抗原性、蛋白理化性质、蛋白免疫表位等生物学信息进行查找、分析;②根据预测结果,筛选出目的抗原,构建以大肠埃希菌为宿主的重组表达载体,通过大肠埃希菌表达系统诱导目的蛋白表达,使用His标签纯化方法得到目的蛋白,纯化后的目的蛋白通过 Western blot验证;③收集临床确诊VVC、复发性外阴阴道假丝酵母菌病(recurrent vulvovaginal candidiasis,RVVC)患者以及正常人的血清标本及阴道分泌物标本,通过ELISA实验检测血清样本中抗原特异性抗体IgG以及阴道分泌物样本中抗原特异性抗体sIgA的水平.结果 ①通过文献查阅和生物信息学分析初步筛选出白假丝酵母菌候选抗原15个;②通过生物信息学数据库预测、筛选免疫原性高、亲水性强、结构稳定、覆盖尽可能多的免疫优势表位的蛋白,最终构建了Eno1、Sap6p、Ywp1p共三个带 His标签的单个蛋白,其中Eno1、Sap6p在E.coli BL21(DE3)中分别呈可溶性表达和包涵体表达,Ywp1p在Rosetta(DE3)中呈可溶性表达,通过 His标签纯化,得到了纯度较高的目的蛋白,经蛋白质免疫印迹实验(Western blot,WB)验证,三个目的蛋白均纯化成功;③ELISA检测血清样本中抗原特异性抗体IgG,其中,Eno1蛋白的VVC组和正常组有统计学差异(P<0.01)、Sap6p蛋白的VVC组和正常组差异有统计学意义(P<0.001)、Ywp1p蛋白VVC组和正常组差异无统计学意义;Eno1、Sap6p、Ywp1p蛋白的RVVC组和正常组、VVC组和RVVC组均差异无统计学意义;Eno1、Sap6p、Ywp1p蛋白均未检测到阴道分泌物样本中抗原特异性抗体sIgA.结论 本实验成功构建并表达纯化了含 His标签的重组蛋白Eno1、Sap6p、Ywp1p,ELISA结果表明Eno1和Sap6p重组蛋白可以作为白假丝酵母菌疫苗的候选抗原.
关键词：白假丝酵母菌外阴阴道假丝酵母菌病重组蛋白免疫原性
分类号：R379.4(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：甘肃省卫生健康行业科研计划项目(GSWSKY2022-17)甘肃省人民医院院内科研基金项目(21GSSYC-51)
论文发表日期：2025-04-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：10( 166-175 )
英文信息