益肾达络饮对DPCPX干预下EAE小鼠H3K9ac、H4K5ac表达的影响

王响; 谢名宗; 何静文; 丁文婧; 尚晓玲

摘要：目的观察益肾达络饮在腺苷A1 受体(adenosine A1 receptor,A1AR)抑制剂 1,3-二丙-8-环戊黄嘌呤(8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine,DPCPX)干预下对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的治疗作用及对组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化(histone H3 lysine residue 9 acetylation,H3K9ac)、组蛋白H4 第 5 位赖氨酸乙酰化(histone H4 lysine residue 5 acetylation,H4K5ac)的影响.方法将60只C57BL/6J雌性小鼠随机平均分成 6 组.除正常对照组外,其余组均制作EAE模型.从造模第8天开始,模型组、DPCPX组予0.9%氯化钠溶液灌胃,西药组予醋酸泼尼松混悬液灌胃,中药组、DPCPX+中药组予益肾达络饮药液灌胃,连续给药 14 d.每日记录各组小鼠的神经功能评分,运用Western Blot检测各组小鼠脑及脊髓中A1AR、H3K9ac、H4K5ac的表达水平,免疫组化观察脑及脊髓中H3K9ac、H4K5ac的表达情况.结果与正常对照组比较,模型组最高平均神经功能评分与第21天评分均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,中药组、DPCPX+中药组、西药组最高平均神经功能评分与第 21 天评分均显著下降(P＜0.05).Western Blot结果显示,与正常对照组比较,模型组脑与脊髓组织中A1AR显著下降(P＜0.01),H3K9ac、H4K5ac显著升高(P＜0.05);与模型组比较,DPCPX组脑中A1AR显著下降(P＜0.05),脑与脊髓中H3K9ac、H4K5ac显著升高(P＜0.05);中药组脊髓中A1AR表达量显著升高(P＜0.05),脑中H3K9ac、H4K5ac显著下降(P＜0.05);DPCPX+中药组脑与脊髓中A1AR显著升高(P＜0.05),脑中H3K9ac显著升高(P＜0.05),H4K5ac显著下降(P＜0.05),脊髓中H4K5ac显著升高(P＜0.05);西药组脊髓中A1AR显著升高(P＜0.01),脑中H3K9ac显著下降(P＜0.01),H4K5ac显著升高(P＜0.05);免疫组化显示,与正常对照组比较,模型组脑与脊髓组织H3K9ac、H4K5ac表达量显著升高(P＜0.05);与模型组比较,DPCPX组脑与脊髓组织H3K9ac、H4K5ac表达量显著升高(P＜0.05),中药组、西药组脑与脊髓组织H3K9ac、H4K5ac表达量显著降低(P＜0.05).结论益肾达络饮可能通过活化A1AR,抑制组蛋白H3、H4的乙酰化水平,调节EAE小鼠的表观遗传修饰,从而降低EAE小鼠的神经功能评分.