左归丸含药血清对成骨细胞中Ihh、Ptch、Smo、GLi1蛋白表达及破骨细胞数量的影响

史婧儒; 廖泽绮; 王雨荷; 赵宏艳; 张元月; 刘梅洁

摘要：目的探讨左归丸含药血清对成骨细胞中Hedgehog-GLi通路关键蛋白表达及破骨细胞数量的影响.方法选用 50只雌性SD大鼠,随机分为空白对照组、假手术组、造模组.造模组大鼠切除双侧卵巢,12 周后随机分为卵巢切除组(ovariectomy,OVX)、阳性对照组和左归丸组.阳性对照组大鼠灌服戊酸雌二醇混悬液,左归丸组大鼠灌服左归丸水煎液,连续干预 7d.末次给药 1.5h后,腹主动脉取血制备各组相应含药血清.建立成骨细胞、破骨细胞、骨磨片共培养体系,分为空白对照血清组、假手术血清组、OVX血清组、阳性对照血清组、左归丸含药血清组、激动剂组和激动剂+左归丸含药血清组,分别添加各组对应血清.免疫荧光法检测成骨细胞印度刺猬蛋白(Indian hedgehog,Ihh)、碎片蛋白(patched,Ptch)、润滑蛋白(smoothened,Smo)及GLi1 蛋白表达;免疫组化法检测成骨细胞骨保护蛋白(osteoprotegerin,OPG)、核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达;对破骨细胞进行TRAP染色,计算TRAP+细胞数;ELISA检测共培养体系上清液中TRAP的含量.结果与假手术血清组比较,OVX血清组Ihh、Ptch、Smo、GLi1 蛋白表达水平显著上调(P<0.01),RANKL/OPG比值增高;TRAP+细胞数和细胞上清液中TRAP含量亦明显增加(P<0.05).与OVX血清组比较,左归丸含药血清组Ihh、Ptch、Smo、GLi1 的蛋白表达明显下调,RANKL/OPG比值下降;TRAP+细胞数和细胞上清液中TRAP含量明显降低(P<0.05).与激动剂组比较,加入左归丸含药血清后,Ihh、Ptch、Smo、GLi1 的蛋白表达及RANKL/OPG比值均明显下降,TRAP+细胞个数及 TRAP 含量亦明显降低(P<0.05).结论左归丸含药血清可通过抑制异常活跃的Hedgehog-GLi信号通路,使Ihh、Ptch、Smo、GLi1 的蛋白表达水平下调,降低RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的数量和活性,起到减少骨丢失作用.