不同类型载体携带Math1-EGFP基因对293T细胞转染效率及细胞毒性的研究
任丽丽
杨仕明
1.解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,1008532.解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科,解放军耳鼻咽喉研究所耳神经生物中心,北京,100853
摘要：目的 比较腺病毒、脂质体、纳米材料三种不同类型的载体携带目的 基因对293T细胞的转染效率及细胞毒性的大小,筛选理想的基因载体.方法 用重组腺病毒、Lipofectamine~(TM) 2000、Entranster~(TM)-D纳米材料为转染载体,携带含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的Math1-EGFP基因及真核表达质粒pRK5-Math1-EGFP,按照转染试剂盒说明优化其转染条件,分别转染293T细胞.24小时后在共聚焦显微镜下观察转染结果 并计数阳性细胞率,采用RT-PCR法检测转染细胞中Math1基因mRNA的表达,用MTT法检测不同转染条件下,不同转染载体对293T细胞的细胞毒性.结果 经优化转染条件,重组腺病毒载体转导的细胞中荧光蛋白表达几乎为95%以上,Lipofectamine~(TM) 2000、Entranster~(TM)-D纳米材料载体转染的细胞中荧光蛋白表达也分别达到70%和80%以上,而Entranste~(rTM)_-D纳米材料载体在最高转染效率的剂量下仍然保持80%以上的细胞生存率.RT-PCR进一步证实,三种载体转染细胞均有Math1基因mRNA的表达.结论 Entranster~(TM)-D纳米载体作为一种新型纳米聚合物转染试剂,能成功携带内耳基因治疗关键基因Math1基因转染293T细胞,并表现了低毒、高效性能.
关键词：Math1293T细胞基因转染基因载体纳米材料
分类号：R349.8(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30871398,30571017,30000189)海外青年合作基金(30628030)北京市自然科学基金(7042 061;2007AA02Z150)国家自然科学基金(30730040)
论文发表日期：2009-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 347-351 )
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