突变型SLC26A4基因表达载体的构建及在HELA 细胞中的表达
张国正1
张勋2
杨仕明3
袁永一3
1.解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853;河北医科大学第三医院耳鼻咽喉科 石家庄0500512.河北医科大学第三医院耳鼻咽喉科 石家庄0500513.解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医院 解放军耳鼻咽喉研究所 北京 100853
摘要：目的 构建含有突变型SLC26A4基因和绿色荧光蛋白基因(PEGFP)的真核共表达载体,为指导临床SLC26A4相关耳聋的基因诊断及产前诊断奠定实验基础.方法 通过快速定点诱变试剂盒定点突变SLC26A4基因,应用基因重组技术和限制性内切酶酶切,及基因测序方法,构建并鉴定PEGFP-SLC26A4 (1517T＞G)真核表达质粒.经脂质体介导转染HELA细胞系,共聚焦显微镜下观察突变型pEGFP-SLC26A4( 1517T＞G)真核表达质粒在HELA细胞系中的表达.结果 阳性重组子经酶切鉴定含有突变型SL C26A4基因片段,基因测序结果正确.重组突变型PEGFP- SLC26A4 (1517T＞G)真核表达质粒转入HELA细胞系后24小时,荧光显微镜下可见绿色荧光表达,并且在细胞膜和胞浆内都有表达.结论 本文成功地构建了突变型SLC26A4基因(1517T＞G)和PEGFP基因的真核共表达载体,且能在HELA细胞系中表达.荧光显微镜下可见细胞膜和胞浆内都有表达,提示该突变型表达蛋白的转运功能可能发生了改变.
关键词：SLC26A4质粒表达
分类号：R349.7(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30801285)北京市科技新星计划(2009B34)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 264-268 )
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