AIF基因的能量代谢功能分析
杨驹
关静
纵亮
王洪阳
张超
张悦
郭维维
翟所强
王秋菊
1.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008532.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008533.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008534.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008535.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008536.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008537.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008538.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京1008539.解放军总医院解放军医学院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所 北京100853
摘要：目的：量化AIF基因在细胞能量代谢中的功能特性，探讨该基因相关听神经病的分子致病机制。方法选择第三代基因编辑工具CRISPR-Cas9技术结合阳离子脂质体转染技术，快速实现对HELA细胞的AIF基因进行敲除，并通过Western blot进行蛋白表达分析，Sanger测序进行基因型的分析，然后利用Oxygraph-2K对多个AIF基因敲除细胞系以及野生型细胞系进行氧化供能的检测，最后采用GraphPad prism5.00进行数据分析。结果通过该方法获得了多株AIF基因敲除细胞系，并发现野生型细胞系耗氧功能明显强于AIF基因敲除细胞系。结论通过CRISPR-Cas9技术的应用，本研究快速实现了AIF蛋白表达缺失细胞系和野生型细胞系在氧化呼吸方面的差异比较，间接量化了该基因缺失所导致的能量损失，能量供应障碍可能是听神经病的致病机制之一。
关键词：AIF基因听神经病CRISPR-Cas9基因敲除氧化耗能
分类号：Q429.8(神经生理学)R394.34(医学遗传学)
资助基金：国家重大科学研究计划(2014CB943001)国家国际科技合作专项基金(81120108009)全军重点项目(十二五)(BWS11J026)
论文发表日期：2015-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 250-254 )
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