大鼠AQP4基因表达载体的构建及在体内表达的观察
石向群1
杨金升1
王运良2
包仕尧2
1.兰州军区兰州总医院神经内科,甘肃,兰州,7300502.苏州大学第二附属医院神经内科,江苏,苏州,215004
摘要：目的克隆大鼠AQP4基因并构建其融合蛋白表达载体,以便载体在体内进行AQP4基因干预.方法采用逆转录构建大鼠脑cDNA文库、聚合酶链反应(PCR)扩增大鼠AQP4基因片断,选用绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,将其构建到pcDNA3.1/Zeo(+)真核表达质粒中,同时在AQP4、GFP基因之间插入IRES片段,以构建AQP4-GFP融合蛋白.在脑立体定位仪下将经预先处理过的AQP4-GFP表达质粒注射到大鼠脑内,荧光显微镜下观测基因表达,免疫组织化学检测脑内AQP4表达水平的变化.结果(1)扩增出长度为993 bp的片段,为AQP4序列的全段,测序结果与基因Bank(U14007)上报道的大鼠AQP4 M1型基因序列相同.(2)注射实验质粒和对照质粒后12 h于注射点局部均可观察到GFP阳性细胞,高峰出现在24 h,至72 h荧光明显减弱.转染实验质粒24 h后可明显提高脑内AQP4表达的水平.结论克隆的大鼠AQP4基因和构建的AQP4表达质粒,在体内获得表达,该质粒可以用于干预体内AQP4基因表达的相关研究.
关键词：水孔蛋白类基因表达聚合酶链反应转染大鼠
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 413-416 )
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