大鼠CREB结合蛋白RNA干扰重组慢病毒载体的构建与鉴定
杨简1
江洪1
陈思思1
陈静1
徐盛开2
王继春2
1.武汉大学人民医院心内科,4300602.武汉大学心血管病研究所
摘要：目的 构建大鼠CREB结合蛋白(CREB binding protein,CBP)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察该载体对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)CBP表达的沉默效应.方法 设计合成4条CBP基因的siRNA序列,将筛选确定的CBP RNAi有效靶序列与pFU-GW-iRNA载体连接产生CBP shRNA慢病毒表达载体,转化、PCR筛选阳性克隆及测序鉴定.脂质体2000将CBP shRNA慢病毒载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞,完成慢病毒颗粒包装及滴度测定.包装产生的重组慢病毒感染大鼠VSMCs,实时定量RT-PCR检测CBPmRNA的表达,并与未转染及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞进行比较.结果 PCR扩增和测序结果 证实,成功构建大鼠CBP shRNA慢病毒载体.经包装产生的慢病毒滴度为2×109TU/ml,与未转染慢病毒及转染阴性对照shRNA慢病毒的细胞比较,CBP shRNA慢病毒转染可使VSMCs的CBP mRNA分别下降88.5%和92.7%.结论 成功构建CBP基因RNAi慢病毒表达载体,对VSMCs的CBP表达具有良好沉默作用,为后期基因治疗血管增殖性疾病奠定基础.
关键词：CREB结合蛋白质RNA干扰转染基因疗法
资助基金：国家自然科学基金(30770849)
论文发表日期：2010-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 348-350 )
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