大鼠胱抑素C腺病毒高效表达载体的构建在大鼠心肌成纤维细胞中的表达
张书敏1
王永梅1
杜贻萌1
魏峰涛1
蒋卫东1
王欣1
董兆强1
姜红2
鹿庆华1
1.山东大学第二医院心血管内科,济南,2500332.教育部和卫生部心血管重构和功能研究重点实验室
摘要：目的 采用GatewayTM技术构建携带胱抑素C(CysC)基因的重组腺病毒载体,并观察在大鼠心肌成纤维细胞中的表达.方法 采用RT-PCR方法从大鼠心肌组织中扩增出CysC基因,将CysC基因经BP重组反应定向克隆至pDONR221载体,获得重组质粒pDONR221-CysC,经PCR及测序验证正确的pDONR221-CysC与腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST在体外进行LR重组反应,CysC取代pAd/CMV/V5-DEST中的ccdB-CmR基因,获得重组腺病毒载体pAd/CMV/V5-DEST-CysC.采用Western blot技术检测CysC蛋白在293A细胞及大鼠心肌成纤维细胞中的表达.将培养的心肌成纤维细胞随机分为实验组、空载体组和对照组.结果CysC腺病毒高效表达载体构建成功,测得病毒滴度为5.36×1010ifu/ml.用重组CysC腺病毒转染心肌成纤维细胞24h后,实验组的转染效率最高(≥90%);与对照组和空载体组比较,实验组CysC蛋白表达明显上调(P＜0.05).结论 成功构建了大鼠CysC腺病毒高效表达载体,并成功包装了含有该基因的重组腺病毒,可有效转染心肌成纤维细胞.
关键词：腺病毒科基因表达转染肌细胞心脏成纤维细胞半胱氨酸蛋白酶抑制剂逆转录聚合酶链反应
资助基金：山东省科技发展计划(2007GG20002028)
论文发表日期：2011-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 252-255 )
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