微小RNA-1慢病毒载体介导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究
邓海燕1
曾俊义2
魏云峰1
王梦洪1
郑泽琪1
彭景添1
张婉2
文通1
张玉崚2
1.南昌大学第一附属医院心血管内科,3300062.江西省高血压病研究所
摘要：目的 通过微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)慢病毒载体转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC),探讨miR-1对MSC向心肌细胞分化的影响.方法 采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠MSC并进行流式细胞学鉴定;构建表达miR-1慢病毒载体;将miR-1慢病毒载体转染大鼠MSC(MSCmiR-1)连续培养15 d,光镜下观察转染后细胞形态,分别于0、4、6、15 d qRT-PCR检测miR-1、心肌相关基因锌指结构蛋白(GATA-4)、肌钙蛋白I(cTnI)、α肌动蛋白(α-actin)的表达;免疫荧光观察cTnI的表达;Western blot检测α-actin的表达.结果 原代大鼠MSC呈长梭形、漩涡状生长,流式细胞学检测显示,98%以上细胞表达CD44和CD29,不足1%细胞表达CD45;成功构建miR-1重组慢病毒载体,病毒滴度为3×108 TU/μl;转导miR-1后,MSCmiR-1高表达心肌特异性相关基因GATA-4、α-actin、cTnI,并随时间逐渐增强,转染4 d免疫荧光检测可见cTnI在部分MSCmiR-1中表达,于15 d时表达最强,Western blot进一步证实了α-actin在MSCmiR-1中表达.结论 转导miR-1至大鼠MSC中可促使其向心肌样细胞的分化.
关键词：微RNAs慢病毒属间质干细胞转染肌钙蛋白I
资助基金：江西省自然科学基金(2010GZY0321)江西省科技支撑计划(2010BSA11700)江西省教育厅青年科学基金(GJJ12153)江西省卫生计生委科技项目(20111021)
论文发表日期：2013-05-02
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 514-520 )
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