骨髓间充质干细胞的分离培养及在精原细胞培养条件下生物学特征的观察
刘风华1
杨冬梓1
王沂峰2
梁晓萍2
彭文明3
曹长安3
陈系古4
郭忠敏4
1.中山大学附属第二医院生殖中心,广东,广州,5101202.广州市第二人民医院妇产科,广东,广州,5101503.广州市第二人民医院病理科,广东,广州,5101504.中山大学实验动物中心,广东,广州,510089
摘要：目的:体外分离、培养、纯化小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并观察MSCs在精原细胞培养条件下的生物学特征,为体内诱导MSCs分化为精原细胞奠定基础.方法:①分离5～6周龄的BALB/c小鼠胫骨、股骨,冲出骨髓,以Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法分离、培养、纯化MSCs;②通过动态观察、苏木精-伊红(HE)染色、透射电镜观察、免疫组化检测细胞表面标记等鉴定MSCs;③用ELISA法检测MSCs培养上清中白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、干细胞因子(SCF)等细胞因子的相对含量,与相应对照组比较;④取第3代MSCs,分组进行诱导培养观察,对照组用基本培养液培养MSCs,实验组用条件培养液诱导培养MSCs.通过显微镜下动态观察、HE染色、免疫组化等方法观察诱导结果.结果:①获得纯化的MSCs;②动态观察培养细胞具有不断增殖的干细胞特性,HE染色细胞呈梭形,透射电镜观察细胞较幼稚,免疫组化检测细胞表面标记CD44、CD90呈阳性,从而鉴定了MSCs;③MSCs培养上清中IL-6、IL-8、G-CSF、SCF等的含量显著高于对照组(P＜0.05);④实验组细胞形态发生变化,CD29、CD117和Oct-4免疫组化染色阳性;对照组细胞形态不变,CD29、CD117和Oct-4免疫组化染色阴性.结论:①用Percoll密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法可获得纯化的MSCs;②通过动态观察细胞特性、HE染色、透射电镜观察、免疫组化检测细胞表面标记等可鉴定MSCs;③MSCs能分泌IL-6、IL-8、G-CSF、SCF等细胞因子;④MSCs在精原细胞培养条件下诱导培养,能表现出精原细胞的一些生物学特征.
关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养精原细胞生物学特征
分类号：Q813(细胞工程)Q492+.4(生殖生理学)
资助基金：广东省自然科学基金(021853)教育部留学回国人员科研启动基金(D002003001)高等学校博士学科点专项科研基金(200220558078)广东省广州市科技局科研项目(2002Z3-EO161)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 350-355 )
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