人精原干细胞的体外培养及其功能鉴定
李彦锋1
郭应禄2
李晓红3
靳凤烁4
孙中义4
1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042;北京大学第一医院泌尿外科研究所,北京,1000342.北京大学第一医院泌尿外科研究所,北京,1000343.北京大学第一医院生殖和遗传医疗中心,北京,1000344.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042
摘要：目的:通过应用多种培养条件下的生殖细胞共培养体系,寻求人精原干细胞(SSC)长期体外生存和扩增的优化途径.方法:应用磁式分选所获得的α6+Thy-1+c-kit-细胞,分别以STO、MEF、Sertoli细胞为饲养层,于DMEM/F12、DMEM或DMEM-SF培养液条件下短期培养,然后选择胎儿Sertoli细胞作为共培养体系,在32℃、5%CO2、DMEM/F12(含10%胎牛血清)培养条件下,分别观察成人和胎儿生殖细胞的长期培养结果.并应用免疫组化技术和SSC移植技术对培养细胞进行初步生物学特性和功能鉴定.结果:在短期培养中,α6+Thy-1+c-kit-细胞在存在饲养层时,可在DMEM和DMEM/F12培养液中稳定生存,1周内存活率可达90%.长期培养条件下,α6+Thy-1+c-kit-细胞逐渐与Sertoli细胞形成紧密的贴附或镶嵌关系,呈单个、成对、短链状或小团簇状;胎儿SSC与成人类似,部分以圆球形散在分布于Sertoli细胞表面,并常可观察到明显的成对或短链状细胞,部分呈有突起的长梭形扁平细胞,与Sertoli细胞相互形成紧密连接;经反复传代3个月,仍可观察到稳定存在的圆球形SSC贴附于Ser-toli细胞表面.由PKH26标记的α6+Thy-1+c-kit-细胞在移植后2个月可迁移至裸鼠生精小管基膜,表现为单个或成对的细胞.生精小管内荧光细胞计数显示α6+Thy-1+c-kit-细胞在体外培养2、4周后仍然保留54.9%和9.2%的SSC.结论:该培养系统的进一步优化将有利于体外产生大量SSC,并有助于进一步深入了解SSC的生物学特性和男性生精功能障碍的治疗.
关键词：精原干细胞睾丸移植细胞培养体外人
分类号：R321+.1(人体形态学)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30200093)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 886-890,894 )
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