人细胞核自身抗原精子蛋白的重组表达及克隆抗体制备
王旻
石建莉
程国艳
胡燕琴
刘春萌
徐晨
1.上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,上海市生殖医学重点实验室,上海,2000252.上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,上海市生殖医学重点实验室,上海,2000253.上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,上海市生殖医学重点实验室,上海,2000254.上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,上海市生殖医学重点实验室,上海,2000255.上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,上海市生殖医学重点实验室,上海,2000256.上海交通大学医学院组织学与胚胎学教研室,上海市生殖医学重点实验室,上海,200025
摘要：目的:获得纯化的人细胞核自身抗原精子蛋白(hNASP)及其多克隆抗体,为其功能研究做准备.方法:提取人睾丸组织总RNA,用自行设计的引物,PCR扩增hNASP的一段序列,PCR产物经TA克隆后,通过BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切克隆到pET-28a(+)中.在E.coli BL21中,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达His融合蛋白.样品超声处理后,经镍离子亲和树脂进行亲和层析纯化.用纯化的重组蛋白免疫家兔获取多克隆抗体.结果:对表达重组蛋白的质粒进行DNA测序以及表达的重组蛋白经过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,证实获取了目的蛋白.ELISA证实免疫家兔后获得高效价的抗体.结论:用上述原核生物表达的方法可以得到纯化的hNASP蛋白,用纯化的蛋白免疫家兔也能获得高效价的抗体.
关键词：人细胞核自身抗原精子蛋白基因克隆蛋白表达多克隆抗体
分类号：R3(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(30470909)上海市"登山行动计划"基础研究重点项目(06JC14046)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 867-871 )
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