应用RNA干扰技术阻断PC-3细胞中Survivin基因的表达
沈建军
郝晓柯
刘家云
苏明权
缪应业
张青
1.第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,7100322.第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,7100323.第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,7100324.第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,7100325.第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,7100326.第四军医大学西京医院检验科,陕西,西安,710032
摘要：目的:用真核转录载体pSilencerTM3.1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体,并转染前列腺癌细胞系PC-3,通过RNA干扰(RNAi)阻断PC-3细胞中survivin基因的表达,并研究survivin基因沉默后对PC-3细胞凋亡产生的影响.方法:将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencerTM3.1-H1 neo线性质粒用T4DNA连接酶连接,重组质粒经酶切及DNA测序鉴定后,用脂质体法转染PC-3细胞,通过RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学染色实验检测survivin的表达变化,并用流式细胞术检测转染后PC-3细胞的凋亡变化,MTr法检测细胞生长速度的变化.结果:酶切及测序证实设计合成的DNA已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学染色实验表明,pSilencer3.1-SVV2和pSilencer3.1-SVV3重组载体有效地阻断了PC-3细胞中survivin基因的表达,survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P＜0.01),转染后PC-3细胞的凋亡增加了10%～15%,细胞生长速度明显变慢.结论:成功构建了针对survivin基因的真核转录载体pSilencer3.1-SVV1、pSilencer3.1-SVV2和pSilencer3.1-SVV3,后两者可有效地阻断前列腺癌细胞系PC-3细胞中survivin基因的表达,并使转染后PC-3细胞的凋亡增加了10%～15%,细胞生长速度明显变慢.
关键词：RNA干扰survivin凋亡前列腺癌细胞
分类号：R3(基础医学)
论文发表日期：2006-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 890-895 )
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