重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定
王增军
张炜
吴宏飞
眭元庚
1.南京医科大学第一附属医院泌尿外科,江苏,南京,2100292.南京医科大学第一附属医院泌尿外科,江苏,南京,2100293.南京医科大学第一附属医院泌尿外科,江苏,南京,2100294.南京医科大学第一附属医院泌尿外科,江苏,南京,210029
摘要：目的:用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原(PSA)重组蛋白,并对其活性进行鉴定.方法:用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSA cDNA,再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶Nde Ⅰ和BamH Ⅰ消化,然后用T4连接酶将两者连接,序列正确的阳性克隆转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人PSA蛋白,从细菌包涵体中纯化PSA蛋白,再用小剂量胰岛素激活PSA活性,观察活化的PSA是否分解其变色底物S-2586和天然底物精囊蛋白Semenogelin(Sg).结果:利用原核表达技术得到了重组人PSA,在胰岛素作用下PSA被激活,活性PSA水解其天然底物Sg和变色底物S-2586.结论:用基因克隆方法体外获得的重组人PSA蛋白可表现与天然PSA同样的丝氨酸蛋白酶活性和功能.
关键词：前列腺特异性抗原表达纯化原核鉴定重组技术分子克隆
分类号：R446.62(诊断学)R697+.3(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
资助基金：国家科技支撑计划(2006BAI03B12)
论文发表日期：2007-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1080-1083 )
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