双片段survivin短发夹RNA腺病毒载体的构建与鉴定
高鹏
单玉喜
阳东荣
1.苏州大学附属第二医院泌尿外科,江苏,苏州,2150042.苏州大学附属第二医院泌尿外科,江苏,苏州,2150043.苏州大学附属第二医院泌尿外科,江苏,苏州,215004
摘要：目的:构建负载双片段survivin短发夹RNA(shRNA)的腺病毒载体,为PCa的基因治疗提供实验基础.方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后亚克隆至腺病毒骨架,构建负载2条survivin shRNA的RNA干扰重组腺病毒载体.提取环状重组病毒质粒进行PCR、酶切双重鉴定后,大规模提取纯化正确的克隆.最后将线性化的重组腺病毒基因组转染至HEK 293A包装细胞包装成病毒,并扩增到所需滴度. 结果:负载双片段survivin shRNA的穿梭质粒载体pShuttle2经Mlu I酶切鉴定,证实双片段survivin shRNA插入正确;完成目的片段至腺病毒骨架的亚克隆后,PCR及PI-Sce I/I-Ceu I双酶切鉴定均证实双片段survivin shRNA插入正确. 结论:负载双片段survivin shRNA腺病毒载体构建成功.
关键词：前列腺癌腺病毒载体survivin短发夹状RNA
分类号：R730.5(一般性问题)
资助基金：江苏省高等学校自然科学研究项目(04KJB320128)
论文发表日期：2008-04-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 324-327 )
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