BALB/c小鼠精原干细胞体外长期培养和鉴定
申复进1
张茨2
杨嗣星2
熊云鹤2
廖文彪2
杜贤进2
王玲珑2
1.武汉大学人民医院,妇产科,湖北,武汉,4300602.武汉大学人民医院,泌尿外科,湖北,武汉,430060
摘要：目的:建立小鼠精原干细胞长期培养体系,探讨精原干细胞体外增殖分化的关键因子.方法:收集出生4～6 d BALB/c绿色荧光小鼠睾丸,采用改良的两步消化法获得细胞悬液,种植到铺有明胶的培养皿中,分别于种植后1、5、24 h通过差速贴壁法去除体细胞,获得高度纯化的精原干细胞,种植到丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养.基础培养液为StemPro-34SFM干细胞培养液并补充15种添加成分;添加20 ng/ml大鼠胶质细胞源神经营养因子(GDNF)、10 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和200 ng/ml DDNF受体αl(GFRα1)促进精原干细胞增殖.分别采用免疫荧光染色和RT-PCR检测精原干细胞已知抗原和标志性基因的表达.结果:饲养层上培养3～4 d后精原干细胞增殖形成典型的克隆,为边缘不清楚的团块状;小鼠精原干细胞能在该培养体系中稳定传代培养达3个月.免疫荧光共聚焦显微镜观察示Oct-4特异性表达在培养的精原干细胞核上;而GFRα1显著表达在培养的精原干细胞膜表面;RT-PCR也证实培养的精原干细胞表达Oct-4、GFRα1、Sox2和c-Pet等象征未分化精原细胞的标志基因.结论:BALB/c小鼠精原干细胞可在体外长期培养(3个月),该培养体系的建立将为研究精原干细胞增殖分化调控机制及精原干细胞移植治疗男性不育奠定基础.
关键词：精原干细胞培养移植小鼠
分类号：R321.1(人体形态学)
资助基金：国家自然科学基金(30400160)
论文发表日期：2008-10-31
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 977-981 )
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