NYD-SP5基因发夹结构小干扰RNA真核表达载体的构建
王菲菲1
潘伯臣1
郑志红2
闫威2
1.中国医科大学,附属盛京医院妇产科,辽宁,沈阳,1100042.中国医科大学,实验动物部,辽宁,沈阳,110001
摘要：目的:NYD-SP5基因是在人睾丸cDNA微阵列差异杂交的基础上,克隆的一个新的成人睾丸高度表达的基因.它由3 598个核苷酸组成,包括一个编码1 027个氨基酸的开放阅读框架./WD-SP5基因是一条人-小鼠同源基因.结构域分析推测NYD-SP5蛋白是一种跨膜蛋白.本研究构建NYD-SP5基因发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒,拟为下一步建立基因NYD-SP5的转基因小鼠模型及研究该基因的功能奠定基础. 方法:根据NYD-SP5基因mRNA序列,设计有小发夹结构的4条寡核苷酸序列,克隆到空载体pGPU6/GFP/Neo中,构建重组质粒,同时设计构建分别针对人GAPDH的干扰质粒作为阳性对照,不针对任何特异基因的质粒作为阴性对照.通过酶切鉴定和测序验证阳性克隆. 结果:经重组质粒筛选及测序鉴定证实,重组质粒与设计的shRNA转录模板序列相同,提示重组质粒构建成功. 结论:利用RNA干扰技术路线可成功构建NYD-SP5的发夹结构小干扰RNA表达载体.
关键词：RNA干扰shRNANYD-SP5基因重组质粒
分类号：R34(基础医学)
论文发表日期：2010-05-02
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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