淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB基因的克隆及原核表达
王彦1
张雷2
张莉2
王涵2
1.大理学院基础医学院病原生物学综合实验室,云南大理671000;连云港市第二人民医院检验科,江苏连云港2220232.大理学院基础医学院病原生物学综合实验室,云南大理,671000
摘要：目的:构建淋病奈瑟菌外膜蛋白PorB的融合表达载体,并在原核系统中表达,获得基因重组蛋白,为进一步研究淋病奈瑟菌外膜蛋白的致病作用和免疫保护性提供基础. 方法:根据PorB已知序列设计一对引物,用PCR方法从淋病奈瑟菌标准菌株NG 29403基因组DNA中扩增出PorB基因,与原核表达质粒pGEX-4T-1构建重组子pGEX-4T-PorB,并将重组质粒转化大肠埃希菌BL21( DE3)感受态细胞.重组子经酶切、PCR鉴定和核酸序列分析正确后,异丙基硫代半乳糖苷(IPrG)诱导重组蛋白的表达,用SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定. 结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了淋病奈瑟菌外膜蛋白1047 bp的PorB基因,成功构建了重组质粒pGEX-4T-PorB,经SDS-PAGE及Western印迹分析显示重组质粒pGEX-4T-PorB在大肠埃希菌中得到了高效融合表达. 结论:成功构建pGEX-4T-PorB原核表达载体,并在原核系统中得到了高效表达.
关键词：淋病奈瑟菌PorB克隆原核表达疫苗
分类号：R378.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：云南省科技厅科研项目(2009ZC123M)
论文发表日期：2011-07-02
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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