重组人中性粒细胞弹性蛋白酶的制备及鉴定
陆金春1
卢坤刚2
张红烨3
高建1
冯瑞祥2
1.武警江苏总队南京医院检验科,江苏南京,2100282.南京欣迪生物药业工程有限责任公司,江苏南京,2111123.南京医科大学附属南京第一医院检验科,江苏南京,210006
摘要：目的:利用基因工程技术制备纯化的重组人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE),为进一步制备HNE的相应抗体和建立精液HNE的检测方法奠定基础. 方法:利用HNE的特异引物从人外周血粒细胞中获得HNEmRNA,并将其cDNA克隆入质粒pGEX-2T中以获得重组质粒pGEX-2T/HNE.重组质粒经PCR、双酶切和基因测序鉴定后转入感受态大肠埃希菌DHSα中,并用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白GST/HNE.重组融合蛋白经凝血酶裂解后获得重组HNE,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化后获得纯化的重组HNE. 结果:成功制备重组表达质粒pGEX-2T/HNE,并转化人大肠埃希菌DH5α中.经IPTG在18℃过夜诱导后成功获得重组融合蛋白GST/HNE的表达.经凝血酶裂解和谷胱甘肽琼脂糖珠纯化后成功获得纯化的重组蛋白HNE. 结论:纯化的重组HNE的获得为进一步制备HNE的相应抗体和建立精液HNE的检测方法奠定了基础.
关键词：中性粒细胞弹性蛋白酶重组蛋白原核表达
分类号：R691.3(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：科技型中小企业技术创新专项(2010-04)
论文发表日期：2011-12-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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