人睾丸酵母双杂交cDNA文库的构建与鉴定
郑英1
张露萍1
贾筱琴2
王海燕1
1.扬州大学医学院组织学与胚胎学教研室,江苏扬州,2250012.扬州大学医学院病理学教研室,江苏扬州,225001
摘要：目的:构建应用于酵母双杂交系统的人睾丸组织cDNA文库.方法:从正常人睾丸组织总RNA中纯化出mRNA,以SMARTⅢTM和CDSⅢ为引物,合成两端具有同源臂的双链cDNA,后者与线性质粒pGADT7 -Rec共转化入感受态酵母细胞Y187,两者在酵母细胞中同源重组成环形的cDNA文库质粒,收集在营养缺陷培养板上筛选出的所有克隆,即为人睾丸酵母双杂交cDNA文库.结果:构建了具有基因多样性和库容量足够大的人睾丸cDNA文库,共获得2×106个转化子,插入的双链cDNA片段的长度在0.3 ～4.0 kb之间.结论:利用Clontech SMART技术,成功构建了应用于酵母双杂交的人睾丸组织cDNA文库,为探讨人精子发生的分子机制奠定了基础.
关键词：酵母双杂交cDNA文库人睾丸
分类号：R339.2(人体生理学)
资助基金：国家自然科学基金(31071020)江苏省自然科学基金(BK2009192)江苏省研究生创新项目(CXZZ11-0996)
论文发表日期：2012-05-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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