昆虫细胞杆状病毒表达系统表达重组人类ZP3蛋白的研究
卢慧1
刁华2
肖玉芳1
于合国2
李铮1
施惠娟2
1.上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科,上海市人类精子库,上海2001352.上海市计划生育科学研究所,国家人口和计划生育委员会计划生育药具重点实验室,上海200032
摘要：目的:探讨利用重组表达系统制备重组人类ZP3(hZP3)蛋白的方法和技术难点,为hZP3蛋白的制备和应用打下技术基础. 方法:构建hZP3的载体质粒pFASTBAC HTa-hZP3,在大肠杆菌宿主细胞中利用杆状病毒Bac-to-Bac系统同源重组构建重组的杆状病毒穿梭载体Baemid,用重组的Bacmid转染Sf9细胞制备重组杆状病毒,分别表达带HIS标签的hZP3全长蛋白(氨基酸1～424)和截短的hZP3蛋白(氨基酸23～ 348).摸索重组hZP3蛋白的表达时间和纯化制备方法. 结果:成功制备了表达重组人hZP3全长蛋白和截短体蛋白的Bacmid和杆状病毒颗粒,Western印迹检测表明,在Sf9细胞中较好的表达时间段为感染后72 ～96 h.重组表达的hZP3蛋白可以部分被钴柱亲和纯化,大量的重组hZP3蛋白不能结合到亲和介质而流穿,但确切的原因还未知.纯化得到的hZP3经荧光素Dylight Dye488标记,能与人精子结合. 结论:利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达hZP3蛋白是可行的,可以进一步优化,但hZP3蛋白的有效富集和纯化方法是最大的瓶颈,还需要进一步摸索.
关键词：人ZP3精子重组蛋白昆虫细胞杆状病毒表达系统
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2014-10-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
英文信息