人源性抗前列腺特异性膜抗原单链抗体的基因构建、表达及鉴定
苏燕胜1
高云1
付晓亮2
王东2
王倩云1
刘娜3
贾红兵1
秦卫军4
温伟红5
1.解放军323医院泌尿外科,陕西西安7100542.第四军医大学唐都医院泌尿外科,陕西西安7100323.西安交通大学第二附属医院药剂科,陕西西安7100044.第四军医大学西京医院泌尿外科,陕西西安7100325.第四军医大学免疫教研室,陕西西安710032
摘要：目的:分别构建人源性抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体(scFv)/鱼精蛋白截短体(tp)、scFv/弗林蛋白酶识别位点(Fdt)/流感病毒融合肽结构域(HA2)/tp融合蛋白基因.利用原核表达体系表达、纯化并检测scFv、scFv-tp、scFv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性.方法:采用PCR的方法,扩增融合基因scFv、scFv-tp、scFv-Fdt-HA2-tp,将获得的基因克隆入原核表达载体pET28,在大肠杆菌BL21中表达,表达产物经SDS-PAGE和Western印迹鉴定,通过Ni2+-NTA螫合层析纯化.ELISA分析融合蛋白抗原亲和活性.结果:成功构建了人源性抗PSMA融合基因,经IPTG诱导后在M15中以包涵体形式表达.表达的目的蛋白均能与PSMA抗原结合.结论:融合蛋白具有结合抗原的活性,为靶向递送siRNA的研究奠定了基础.
关键词：前列腺特异性膜抗原单链抗体融合蛋白靶向输送
分类号：R34(基础医学)
论文发表日期：2014-11-16
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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