人精原干细胞分离、培养与鉴定
王俊龙1
杨施1
田汝辉1
朱子珏1
郭英2
袁青青2
何祖平2
李铮1
1.上海交通大学医学院附属仁济医院泌尿外科,上海,2001272.上海交通大学医学院附属仁济医院临床干细胞中心,上海,200127
摘要：目的:分离、鉴定和培养人精原干细胞(SSC),以获得纯化、富集的人SSC并为其研究与应用奠定基础. 方法:通过免疫荧光方法检测睾丸组织中CD90表达情况;应用两步酶消化和差速贴壁法分离人睾丸生精细胞,以CD90为人SSC标志,用免疫磁珠分选技术(MACS)对人睾丸生精细胞进行分选,并利用RT-PCR和免疫细胞化学对分选所得CD90+细胞进行鉴定;同时用SG培养液将CD90+细胞与支持细胞进行体外共培养. 结果:MACS分选所得CD90+细胞大小、形态特征较为均一,RT-PCR检测其表达人SSC标记性基因,免疫荧光检测其高表达人SSC特异标记GFRA-1、GPR 125和UCHL-1,阳性率达90.5％,其在SG培养液中与支持细胞共培养14 d后仍可保持良好活性. 结论:CD90可作为人SSC特异性标志之一,结合差速贴壁和MACS可高效分选人SSC,分选所得SSC可在SG培养液中进行体外培养.
关键词：人精原干细胞CD90分离鉴定培养
分类号：R698+.2(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
论文发表日期：2015-03-02
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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