重组小鼠Parkin共同调节基因在昆虫细胞系统中的表达
刘晙玭1
李洪涛2
李为3
刘红4
张玲5
闵洁5
周婷5
周磊2
张志兵4
1.武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;武汉市职业病防治院,湖北武汉430015;Department of Obstetrics & Gynecology, Virginia Commonwealth University, Richmond, VA, 232982.Department of Physiology, Virginia Commonwealth University, Richmond, VA, 232983.Department of Obstetrics & Gynecology, Virginia Commonwealth University, Richmond, VA, 232984.武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉430065;Department of Obstetrics & Gynecology, Virginia Commonwealth University, Richmond, VA, 232985.武汉科技大学医学院公共卫生学院,湖北武汉,430065
摘要：目的:构建小鼠Parkin co-regulated gene(Pacrg)/GFP-pFastBac1重组杆状病毒载体,并在Sf9昆虫细胞中表达. 方法:PCR扩增小鼠全长Pacrg编码cDNA序列,通过TA克隆、连接等方法将该基因插入到携带eGFP的供体质粒pFastBac1中,获得重组载体rpFBac-Pacrg-GFP,然后转化到DH10Bac宿主菌中.筛选获得的重组杆状病毒载体rBacmid-Pacrg-eGFP经脂质体转染至Sf9昆虫细胞中,荧光显微镜及Western印迹检测分析重组蛋白. 结果:经测序及酶切鉴定显示构建的Pacrg/GFP-pFastBac1重组杆状病毒载体正确,Western印迹结果显示PACRG/eGFP融合蛋白在Sf9昆虫细胞中表达且携带绿色荧光. 结论:成功构建了Pacrg/GFP-pFastBac1重组杆状病毒载体,且该重组蛋白在Sf9昆虫细胞中大量表达,为进一步研究PACRG蛋白的结构及其在精子发生中的调控作用奠定了基础.
关键词：Parkin共同调节基因杆状病毒载体昆虫细胞真核表达精子发生
分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2016-07-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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