精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨
闵洁1
李梦颖1
柳赟昊1
刘晙玭1
双超凡1
张玲1
张志兵2
1.武汉科技大学医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室,湖北武汉,4300652.武汉科技大学医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室,湖北武汉430065;Departments of Obstetrics and Gynecology and Biochemistry, Virginia Commonwealth University,Richmond, VA 23298, USA
摘要：目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用. 方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成cDNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达.构建Tac1/pGADT7、Tac1/pEGFP-N2重组质粒,将Tac1/pEGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达.将Tac1/pGADT7与Spag6/pGBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用. 结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达.酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp.TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达.与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6. 结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系.
关键词：速激肽1精子相关抗原6细胞定位酵母双杂交雄性小鼠
分类号：R34(基础医学)
论文发表日期：2016-11-30
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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