人源类溶菌酶蛋白4的多克隆抗体制备及其表达分析
黄鹏1
杨智昉1
徐一新2
鲍建瑛1
张宁1
曹晓娥1
李文姝3
1.上海健康医学院基础医学院,上海,2013182.上海健康医学院药学院,上海,2002373.上海纽约大学文理学部,上海,200122
摘要：目的:以原核表达的人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)为免疫原制备多克隆抗体,检测LYZL4在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供依据. 方法:将LYZL4编码基因克隆于原核表达载体pET32a,IPTG诱导重组LYZL4(rLYZL4)表达.分别使用Ni-NTA树脂和甲壳素亲和层析纯化rLYZL4,采用双层琼脂平板扩散法检测杀菌活性.以Ni-NTA树脂纯化产物为免疫原制备兔抗rLYZL4多克隆抗体,通过ELISA测定抗体效价,Western印迹检测抗体特异性后,检测LYZL4蛋白在人体各组织的分布及其在精子和精浆中存在情况,免疫组化确认LYZL4在人睾丸组织中的定位. 结果:原核表达系统可有效表达rLYZL4,其对溶壁微球菌及大肠杆菌无杀灭活性.制备的兔抗rLYZL4多克隆抗体具有很高的效价和特异性,在睾丸、附睾及人精子蛋白提取物中可检测到LYZL4存在,在生精小管中,LYZL4定位于圆形精子细胞及长形精子细胞的顶体上. 结论:本研究成功以原核表达的rLYZL4制备了该蛋白的多克隆抗体,确认LYZL4在睾丸和附睾有表达,并定位于精子顶体上,提示其可能与顶体结构或功能相关.
关键词：人源类溶菌酶蛋白4原核表达系统多克隆抗体睾丸精子
分类号：R392.11(医学免疫学)Q786(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2017-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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