携带siRNA的慢病毒载体抑制自发性高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞S1PR3的表达
吴邦财
夏纪毅
姜睿
杨海帆
1.西南医科大学附属医院泌尿外科,四川泸州,6460002.西南医科大学附属医院泌尿外科,四川泸州,6460003.西南医科大学附属医院泌尿外科,四川泸州,6460004.西南医科大学附属医院泌尿外科,四川泸州,646000
摘要：目的:筛选出能够高效特异性沉默自发性高血压大鼠(SHR)阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)内1-磷酸鞘氨醇受体3(S1PR3)基因表达的siRNA慢病毒载体,并观察其对SHR CCSMC ROCK1、ROCK2、eNOS表达的影响. 方法:以大鼠S1PR3基因mRNA序列作为干扰靶点,设计并合成3对靶向S1PR3的siRNA序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及1对阴性对照序列,构建并包装成慢病毒载体.体外培养SHR CCSMC及魏-凯二氏大鼠(WKY) CCSMC,随机分为A组(SHR对照组)、B组(携带阴性对照病毒的SHR CCSMC转染组)、C～E组(分别携带靶向S1PR3基因siRNA 1～3号靶点慢病毒的SHR CCSMC转染组),F组(WKY对照组),以感染复数(MOI)=60转染SHR CCSMC,转染后观察细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达情况,并用RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中S1 PR3、ROCK1、ROCK2、eNOS mRNA及蛋白的表达情况. 结果:经基因测序证明慢病毒载体构建成功.荧光显微镜下观察B～E组细胞转染效率均＞80％.与A组相比,B组S1PR3、ROCK1、ROCK2 mRNA及蛋白的表达均无明显改变(P均＞0.05),C、D、E、F组的S1PR3、ROCK1、ROCK2mRNA及蛋白的表达均较A组显著下降(P均＜0.05),其中E组抑制作用最为明显,使S1PR3 mRNA及蛋白表达的抑制效率分别为(34.2±2.9)％、(77.7±4.7)％;ROCK1 mRNA及蛋白表达的抑制效率分别为(33.3±1.4)％、(51.1±7.3)％;ROCK2mRNA及蛋白表达的抑制效率分别为(30.8±3.6)％、(58.32±5.5)％.A组eNOS mRNA及蛋白表达分别与B、C、D、E比较无明显差异(P均＞0.05),但较F组显著降低(P＜0.05);与F组比较,E组S1 PR3、ROCK1、ROCK2mRNA及蛋白的表达均无明显改变(P均＞0.05),A、B、C、D组的S1PR3、ROCK1、ROCK2 mRNA及蛋白表达均显著高于F组(P均＜0.05),A、B、C、D、E组eNOS mRNA及蛋白表达均较F组显著降低(P均＜0.05). 结论:本研究构建的3条携带不同位点的S1 PR3基因的siRNA慢病毒载体均能够显著抑制SHR CCSMC内S1PR3基因的表达,并能有效抑制SHR CCSMC中上调的RhoA/Rho激酶信号通路,其中携带siRNA3慢病毒载体的抑制效率最高.
关键词：自发性高血压大鼠1-磷酸鞘氨醇受体3RNA干扰慢病毒载体阴茎海绵体平滑肌细胞
分类号：R698+.1(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
论文发表日期：2017-01-31
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
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